粗純的作用是分離差異較大的物質(zhì)，如固液分離、胞內(nèi)或胞外物質(zhì)分離，減少下游純化工藝的負(fù)擔(dān)。以大腸桿菌或酵母為表達(dá)平臺(tái)的重組蛋白粗純工藝包括培養(yǎng)上清、胞內(nèi)可溶物或包涵體的分離，通常選擇離心和破碎的方式實(shí)現(xiàn)。

由于小試與生產(chǎn)規(guī)模不同，耀海研發(fā)實(shí)驗(yàn)室和車間配備的離心和均質(zhì)設(shè)備也有所差異，而離心和均質(zhì)參數(shù)的轉(zhuǎn)換尤其重要，很大程度上影響產(chǎn)品的質(zhì)量和收率。因此小試發(fā)酵工藝放大至生產(chǎn)規(guī)模時(shí)，耀海團(tuán)隊(duì)會(huì)判斷設(shè)備差異對(duì)工藝過(guò)程及產(chǎn)物的影響。耀海建議在小試與GMP生產(chǎn)的轉(zhuǎn)移過(guò)程中，增加中試放大的環(huán)節(jié)，以調(diào)整工藝參數(shù)使其高度契合生產(chǎn)規(guī)模。

耀海生物具有超十年微生物表達(dá)體系重組蛋白和質(zhì)粒DNA生產(chǎn)及服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，針對(duì)不同性能/品牌的離心和均質(zhì)設(shè)備積累了豐富的工藝放大經(jīng)驗(yàn)。我們可識(shí)別并控制關(guān)鍵參數(shù)，成功實(shí)現(xiàn)粗純工藝的放大生產(chǎn)，有效去除雜質(zhì)的同時(shí)保證目的蛋白的收率。

服務(wù)詳情

粗純工藝放大前后的差異

粗純工藝放大經(jīng)驗(yàn)分享

離心的目的是實(shí)現(xiàn)固液分離，應(yīng)用場(chǎng)景包括菌體或上清液收集、菌體碎片去除和包涵體收集等，關(guān)鍵參數(shù)包括轉(zhuǎn)速、進(jìn)料速度和排渣時(shí)間。離心不達(dá)標(biāo)會(huì)導(dǎo)致固液分離效果不佳，可能會(huì)降低產(chǎn)物收率或增加下游純化負(fù)擔(dān)。

高壓均質(zhì)機(jī)可用于破碎細(xì)胞，釋放胞內(nèi)產(chǎn)物，關(guān)鍵參數(shù)包括流速、均質(zhì)壓力和次數(shù)，控制指標(biāo)為菌體破碎程度。菌體破碎不充分會(huì)降低產(chǎn)物收率；破碎過(guò)度會(huì)導(dǎo)致菌體碎片無(wú)法去除，釋放過(guò)多雜質(zhì)、增加純化壓力。

耀海團(tuán)隊(duì)基于豐富的產(chǎn)物粗純服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)了離心和高壓均質(zhì)工藝轉(zhuǎn)移過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題和解決方法：