外泌體是由細胞分泌的胞外囊泡（sEV），可能影響細胞間的通訊，其中外泌體中負載的異質(zhì)性是外泌體多種功能的基礎。闡明貨物分揀到外泌體的機制是理解外泌體異質(zhì)性及其功能的關鍵。轉運必需內(nèi)體分選復合物（ESCRT）系統(tǒng)在外泌體發(fā)生過程中起著重要作用。HRS（肝細胞生長因子調(diào)節(jié)的酪氨酸激酶底物）是ESCRT的關鍵組成部分，它介導初始負載識別和分選到多囊泡內(nèi)體（MVE），然后將其輸送到質(zhì)膜進行外泌體分泌。
近期的研究發(fā)現(xiàn)，在細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）磷酸化后，HRS在空間上阻止了CD8+T細胞浸潤到黑色素瘤組織中。在機制上，磷酸化HRS與PD-L1發(fā)生強烈相互作用，并選擇性地促進PD-L1負載到外泌體，從而阻斷CD8+T細胞浸潤。在各種小鼠模型中，組成性磷酸化HRS的表達導致對抗PD-1治療的抵抗，而抑制HRS磷酸化可增強PD-1阻斷的治療效果。因此，抑制HRS磷酸化可能作為增強ICB治療的潛在策略。
ERK對HRS的磷酸化限制了CD8+T細胞向腫瘤的浸潤
使用特異性針對HRS磷酸化的抗體，能夠在細胞中檢測到磷酸化HRS。使用該抗體，在黑色素瘤患者樣本的組織中檢測HRS的磷酸化和CD8+T細胞的分布。結果顯示，與低HRS磷酸化的腫瘤相比，高HRS磷酸化的腫瘤中的CD8+TIL水平低。原發(fā)性黑色素瘤中CD8+TIL的數(shù)量與HRS磷酸化水平呈負相關（R=?0.4060; P<0.001）。
HRS磷酸化抑制TIL并誘導抗PD-1治療的耐藥性
CD8+T細胞浸潤與抗腫瘤免疫有關。為了研究腫瘤細胞中的HRS磷酸化是否參與免疫抑制，研究建立了穩(wěn)定的YUMMER1.7細胞系，表達野生型（“HRSWT”）、磷酸化缺陷型（“HRSS345A”）和磷酸化突變型（“HRSS345D”）。
隨后在C57BL/6小鼠中，研究了HRS磷酸化是否影響YUMMER1.7腫瘤的PD-1阻斷治療。結果顯示，抗PD-1抗體有效抑制表達HRSS345A腫瘤的生長，而PD-1阻斷的抑制作用在HRSWT腫瘤中降低，在HRSS345D腫瘤中幾乎消失。這些結果表明，由HRS磷酸化誘導的免疫抑制阻礙了PD-1阻斷性抗體的效果，因此，抑制HRS磷酸化可能增強PD-1阻斷劑的治療效果。
HRS磷酸化導致PD-L1在外泌體中選擇性富集
接下來，研究了HRS磷酸化調(diào)節(jié)T細胞浸潤的機制。HRS是ESCRT復合物的關鍵組成部分，它介導PD-L1向MVE的富集，PD-L1可以從MVE轉移到溶酶體進行降解，這對PD-L1表面表達至關重要；也可以作為PD-L1外泌體分泌到細胞外，有助于腫瘤的免疫抑制作用。
通過對不同HRS磷酸化水平的細胞進行熒光染色，可以發(fā)現(xiàn)，PD-L1水平在HRS磷酸化高水平的HRSS345D細胞分泌的EVs中增加。此外，免疫沉淀研究表明，PD-L1與HRSS345D有強相互作用，而這種相互作用在S345A突變型中減弱。
這些結果表明，ERK介導的HRS磷酸化促進PD-L1向MVE的募集并以外泌體分泌。
HRS磷酸化的sEV有效抑制CD8+T細胞浸潤
輸注來自B16F10細胞表達PD-L1的sEVWT或sEVS345D可顯著促進小鼠模型中的PD-L1-KO B16F10腫瘤生長，在Rag2?/?小鼠的腫瘤中沒有觀察到這種作用。sEVWT和sEVS345D抑制了CD8+T細胞向PD-L1-KO B16F10腫瘤的浸潤，這與表達不同HRS突變體腫瘤中的CD8+TIL分析一致。
小結
腫瘤浸潤的細胞毒性T細胞與患者對ICB的反應密切相關。為了制定有效的新策略來改善患者響應，了解T細胞腫瘤浸潤的分子機制至關重要。新的研究表明，HRS的磷酸化對于CD8+T細胞的腫瘤浸潤至關重要，并且這種作用主要由表達PD-L1的外泌體介導。HRS磷酸化在抗PD-1治療的耐藥性中起著至關重要的作用。開發(fā)針對HRS磷酸化的小分子藥物可能會提高PD-1阻斷劑的療效。
參考文獻：
1.HRS phosphorylation drives immunosuppressive exosome secretion and restricts CD8+T-cell infiltration into tumors. Nat Commun. 2022; 13: 4078.
